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            一抗專題

            多克隆抗體與單克隆抗體的區別

            發布時間:2023-08-20 12:29:43 點擊:2217

            多克隆抗體和單克隆抗體的關鍵差異及各自的優缺點。

            小結

            多克隆抗體單克隆抗體
            制備成本低廉制備成本高昂
            制備技能要求不高應用技術之前需接受專門培訓
            制備速度較快需要較長的時間制備雜交瘤細胞
            產生大量非特異性抗體產生大量特異性抗體

            識別任一抗原上的多個表位

            僅識別一個抗原上的單一表位
            批次間可能存在差異制得的雜交瘤細胞為持續且可再生產的單克隆抗體來源
            -批次間無差異或差異較小


            多克隆抗體

            特點

            • 識別任一抗原上的多個表位。所得血清為異質性抗體混合物,其親和力各有不同。

            • 多克隆抗體主要由 IgG 亞類組成。

            • 通常使用多肽免疫原制備以獨有表位為靶標的多克隆抗體,尤其是針對高同源性的蛋白家族。

            抗體制備:

            • 制備成本低廉且制備速度較快。

            • 制備過程比單克隆抗體簡單。


            優點:

            多克隆抗體可識別任一抗原上的多個表位,因此具有以下優點:

            • 高親和性:由于靶蛋白上的多個表位能夠結合不止一個抗體分子,多克隆抗體可放大低表達水平靶蛋白的信號。但是,這會影響定量實驗(如流式細胞術實驗)結果的準確性。

            • 可識別多個表位,有利于免疫沉淀 (IP) 和染色質免疫沉淀 (ChIP) 實驗獲得更好的結果。

            • 與單克隆抗體相比,對微小抗原變化(例如多態性、糖基化異質性或者輕微變性)的包容性更強。

            • 可識別與免疫原蛋白質具有高度同源性的蛋白質,還可用于篩查非免疫原物種的靶蛋白。

            • 通常是檢測變性蛋白質的首選。

            • 多表位通??商嵘龣z測的穩定性。


            缺點:

            • 易產生批次間差異。

            • 產生大量非特異性抗體,可能會在某些應用中產生背景信號。

            • 由于具有多個表位,檢測免疫原序列的交叉反應性非常重要。

            • 不適用于探測抗原的特定結構域,因為抗血清通常會識別多個結構域。


            單克隆抗體


            特點:

            • 不易產生批次間差異。

            • 僅由一種抗體亞型組成(例如 IgG1、IgG2、IgG3)。如需使用二抗進行檢測,應針對正確的亞類選擇抗體。

            抗體制備:

            • 技術要求較高。

            • 應用技術之前需接受專門培訓。

            • 需要花費較長時間制備雜交瘤細胞。


            優點:

            制得的雜交瘤細胞為持續且可再生產的單克隆抗體來源,而且所有批次均相同,有助于提升實驗過程和實驗結果的一致性和標準化水平。

            單克隆抗體只檢測每個抗原上的一個表位,因此具有以下優點:

            • 切片和細胞染色產生的背景信號更少。特異性地檢測一個靶表位,不易與其它蛋白質發生交叉反應。

            • 由于具有高特異性,單克隆抗體非常適于用作實驗中的一抗,其產生的背景染色信號通常顯著低于多克隆抗體。

            • 相較于多克隆抗體,單克隆抗體的同質性非常高。在相同的實驗條件下,單克隆抗體實驗之間的結果重現性非常高。

            • 得益于其高特異性,單克隆抗體能夠在相關分子的混合物中(例如在親和純化過程中)極為高效地結合抗原。


            缺點:

            • 特異性過高,以致于無法進行跨物種的檢測。

            • 與多克隆抗體相比,更易受化學處理造成的抗原表位丟失的影響。這可通過合并靶抗原相同的兩種或多種單克隆抗體進行補償(例如使用抗體組合試劑盒)。


            沒有了
            在WB實驗中,內參對照至關重要.
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